换培养基就团灭？iPSC无痛转换培养环境操作指南
本文将聚焦iPSC驯化，手把手教你如何在细胞的培养过程中，无缝切换到新的培养基！
诱导多能干细胞（iPSC）具有分化为人体任何细胞类型的潜力，在科研和临床应用领域前景广阔。在iPSC的培养过程中，常因研究或生产需求，需将其从一种培养基转移到另一种培养基，如在维持其未分化状态的条件下更换不同品牌或配方的维持培养基。但iPSC对培养环境敏感，直接转移培养体系易导致细胞应激、分化甚至死亡。
因此，驯化iPSC细胞至关重要，它能让iPSC逐步适应新环境，维持其多能性、增殖能力及未分化状态，为后续实验和应用奠定良好基础。
培养基选择
明确起始和目标培养基。起始培养基要能维持iPSC未分化状态与多能性，如新葡萄新京威尼斯游戏OriCell®自研的iPSC完全培养基（货号HUIPS-90011，文末开放免费试用申请）；目标培养基则依后续实验或生产要求选，若用于特定细胞分化，选含相应诱导因子的培养基。同时，了解两种培养基成分差异，包括生长因子、营养物质、添加剂等，以便在驯化中调整。
起始细胞状态评估
挑选生长良好、未分化且无污染的iPSC进行驯化。在显微镜下，未分化iPSC集落边缘清晰、细胞紧密排列、折光性强。还可通过检测多能性标志物（如Oct4、Sox2、Nanog等）的表达来确认细胞状态，常用免疫荧光染色、流式细胞术或实时定量PCR等方法。
实验材料准备
准备好细胞培养皿、移液管、离心机、显微镜等常规细胞培养器材，以及消化液（如Accutase、EDTA消化液等）、PBS缓冲液等试剂。
- P1 Day 1 (起始点)：细胞生长于原培养基A中，状态良好（>80%汇合，形态典型）。
- P1 Day 2 (25%新培养基)：小心吸弃旧培养基。加入混合培养基：75%旧培养基 (A) + 25%新培养基 (B)。 轻柔混匀。显微镜下观察细胞形态，应无明显变化。
- P1 Day 3 (50%新培养基)：吸弃旧液。加入混合培养基：50% A + 50% B。观察细胞，应保持良好形态，边缘光滑，核质比高。
- P1 Day 4 (50%新培养基)；细胞传至P2，加入混合培养基重悬细胞并接种：50% A + 50% B。密切观察（警惕边缘粗糙、空泡出现）。
- P2 Day 1 (50%新培养基)：吸弃旧液。加入混合培养基：50% A + 50% B。观察细胞，应保持良好形态，边缘光滑，核质比高。
- P2 Day 2 (75%新培养基)：吸弃旧液。加入混合培养基：25% A + 75% B。观察细胞，应保持良好形态，边缘光滑，核质比高。
- P2 Day 3 (100%新培养基)：吸弃旧液。加入培养基B。细胞应已基本适应，形态稳定。
- P2 Day4 (100%新培养基)：细胞基本适应新环境，即可使用培养基B进行以后的传代培养。
iPSC细胞的驯化基本经历2个代次即可完成
04 iPSC细胞状态变化的观察与关键检测指标
形态学观察(每日必做)
-
健康标志：细胞贴壁牢固，边缘清晰光滑，胞体饱满，核大核仁明显，克隆边缘紧密，克隆内细胞均一。
-
预警信号：细胞变圆、脱落、边缘粗糙、出现大量空泡、细胞碎片增多、克隆松散解体——这些都是不适应或应激的表现！需暂停或回退梯度。
存活率与增殖监测
-
台盼蓝染色：定期（如每次换液后24小时）检测死细胞比例。存活率应保持在>90%，且无明显下降趋势。
-
汇合度评估：观察细胞增殖速度是否在换入更高比例培养基B后出现明显减缓。
多能性标志物检测 (驯化终点验证)
-
免疫荧光染色：在完全转换到培养基B并稳定生长1-2代后，检测核心多能性蛋白：OCT4，SOX2，NANOG，SSEA-4，TRA-1-60。阳性表达率应与驯化前在培养基A中相当（通常要求>90%）。
-
qPCR：检测多能性基因（OCT4，SOX2，NANOG，REX1等）的表达水平，确保未发生显著下调。
核型分析(长期稳定性)
对于长期在培养基B中培养的iPSC，应定期进行G显带核型分析，确认未发生染色体异常（尤其是在转换培养基后）。
1. 操作轻柔：在更换培养基、洗涤细胞和传代过程中，动作要轻柔，避免对细胞造成物理损伤，影响细胞状态。
2. 无菌操作：整个驯化过程需严格遵守无菌操作规范，防止微生物污染，污染可能导致细胞生长异常甚至实验失败 。
3. 密切观察：每天密切观察细胞状态，及时发现细胞形态、生长速度、标志物表达等方面的变化。对异常情况详细记录并分析，迅速调整驯化策略。
4. 设置对照：建议设置平行对照实验，一组细胞在原起始培养基中培养，作为对照，用于比较驯化组细胞状态变化，更准确评估驯化效果 。
通过上述温和、逐步的驯化过程，密切观察细胞状态变化并及时检测，能帮助iPSC顺利从一种培养基过渡到另一种培养基，维持良好细胞状态，为后续实验和应用提供优质细胞资源。
填写需求描述给我们
工具快速咨询
400-680-8038
info@oricellbio.cn
在线咨询
电话咨询
