「脂肪变形记」如何一步步诱导骨髓间充质干细胞成脂分化
干细胞诱导分化是新葡萄新京威尼斯游戏OriCell®的明星业务，近二十年来我们的诱导分化试剂盒和技术服务已助力全球众多研究机构。
此前我们精心编写了「人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化」实验图文详解一经推出便深受欢迎，本篇为大家带来超详细的「人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化」图文详解，请耐心观看，相信你一定会有更多收获。
间充质干细胞成脂诱导技术是通过定向分化间充质干细胞为脂肪细胞，该技术在再生医学中具有重要应用价值，可用于修复创伤或疾病导致的软组织缺损，同时在疾病机制研究中，帮助揭示骨髓脂肪化与血液疾病（如白血病）的关联性，并为代谢性疾病（如肥胖、糖尿病）提供研究模型，此外还应用于药物筛选和靶点验证，为相关治疗策略开发提供重要工具。
- 分化潜能：成脂诱导分化依赖于间充质干细胞（MSC）的多向分化潜能，包括向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞等分化，故通过特定的诱导条件，可使MSC定向分化为脂肪细胞。
- 核心原理：激活细胞内的成脂信号通路（如PPARγ、C/EBP家族），调控脂质代谢相关基因表达，促使细胞积累脂滴并形成成熟脂肪细胞的表型特征，最终实现体外脂肪组织的模拟构建。
- 验证标志：通过油红O染色显示脂滴，可以确认成脂分化成功。
以下以人源骨髓间充质干细胞的成脂诱导分化例举：
所需材料：
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原代细胞：OriCell®人骨髓间充质干细胞（货号HUXMA-01001）
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培养基：OriCell®人骨髓间充质干细胞完全培养基（普通型货号HUXMA-90011，即用型货号HUXMA-80011）
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成脂诱导培养基：OriCell®人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒（货号HUXMX-90031，A液+B液，套装含基础培养基+胎牛血清+诱导因子+明胶+油红O染色液）
- 细胞包被：用0.1%明胶包被培养容器，孵育30分钟，增强细胞贴附性。
- 细胞接种：取对数生长期的人骨髓间充质干细胞制成单细胞悬液，以3×10⁴ cells/cm²的密度接种至包被后的培养器皿，在培养过程中，使用OriCell®人骨髓间充质干细胞完全培养基来维持细胞的生长和增殖。
- 诱导启动：当培养至90%-100%汇合度时开始诱导，弃原培养基换OriCell®人骨髓间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒进行成脂诱导，前期按照“3天A液、1天B液”循环诱导，后期换成B液维持。（试剂盒配置方法及诱导步骤请详见产品说明书）
划重点
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诱导过程换液需要轻柔，建议沿着培养器皿侧壁轻柔滴加诱导液，防止细胞脱壁（细胞卷边）。
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当观察到有大量小脂滴出现时，停止A液诱导，换B液维持。如图中诱导6天时后续可换成B液维持，直到脂滴看上去如石榴籽状。
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每次换液前需将培养基预热；每次换液需及时，以防细胞因营养不够导致状态不佳或死亡。
hBMSC成脂诱导过程中，细胞状态变化大图
诱导6d
诱导12d
诱导18d
诱导21d
油红O染色步骤
- 终止诱导与清洗：吸弃成脂诱导培养基，用预冷的1×PBS轻柔清洗细胞2-3次，去除残留培养基。
- 细胞固定：每孔加入固定液，室温固定30分钟。
- 染色反应：吸弃固定液，1×PBS清洗2次后，加入油红O工作液覆盖细胞，室温染色30分钟。
- 终止染色与清洗：吸弃染色液，1×PBS清洗2-3次至无浮色残留，加入1×PBS保持湿润。
- 染色结果：细胞质内出现大小不等的圆形或椭圆形红色脂滴，脂滴数量多且分布密集则分化成功；反之无红色脂滴，或仅有零星微小颗粒则分化失败。
成功收获了漂亮的油红O染色图
hBMSC 诱导21d
划重点
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油红O工作液的配制：按油红O贮存液：蒸馏水=3：2，混匀后250×g离心4分钟，使用上清；或者混匀后过滤使用。
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染色背景高？油红O染色后充分洗涤，或缩短染色时间。
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脂滴模糊？脂滴边界不清晰，可能因细胞过度分化（脂滴融合破裂）。
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细胞状态：选用低代次且状态佳的细胞，诱导效果更好。
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清洗染色液时需注意洗去杂质（细胞碎片或者染色液不溶物），杂质会影响染色效果。
1、A液可以长时间使用吗？
A、B交替诱导是为了减轻A液中试剂对干细胞的影响，如果干细胞状态较好可在前7天先只使用A液进行刺激诱导（中途每2~3天更换新鲜A液），待脂滴快速出现后，再进行两种培养基交替诱导的操作。
2、有脂滴的情况下，为什么油红O染色浅？
油红O染色液需提前拿出恢复至室温，未恢复室温的染色液染色效果差。
3、为什么孔板边缘的成脂现象会更明显？
主要是边缘优势：细胞接种时受液体表面张力影响，易向孔壁聚集（弯月面效应），导致边缘细胞密度更高，使细胞间接触增多，更容易激活成脂分化关键信号。
4、诱导到什么程度说明可以进行油红O染色了？
一般情况下脂滴大小>2μm；成脂率>50%，即可进行染色。
看完这篇全解析，是不是已经迫不及待想动手实验了？别急，文末还有惊喜和干货等着你！
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